Sigma 公司的 Mission Lenti-miRs 表达miRNA 来自一副共同的主干,其结构满足精确切割处理的要求,部分互补链旨在使用专有算法模拟主干结构中的碱基配对模式。将含有 microRNA 序列的寡核苷酸克隆到 TRC2-pLKO-puro 载体中。每个 miRNA 构建体都已被克隆和序列验证。 成熟的 microRNA 序列从 miRBase 获得。慢病毒转导颗粒由序列验证的慢病毒质粒载体产生。将含有 microRNA 序列的寡核苷酸克隆到 TRC2-pLKO-puro 载体中。将该载体与兼容的包装质粒共转染到适当的细胞系中,产生可用于转导哺乳动物细胞的病毒颗粒。聚合酶 II 启动子、延伸因子 1 α(EF1A)被选择用来驱动病毒 RNA 逆转录和病毒 DNA 整合到宿主细胞基因组中所需的 miRNA 表达。 此外,土拨鼠肝炎转录后调控元件允许增强慢病毒载体传递的转基因的表达。该慢病毒载体还携带用于选择细胞的嘌呤霉素抗性基因。与基于鼠的 MMLV 或 MSCV 逆转录病毒系统不同,基于慢病毒的颗粒允许有效感染并将特定 miRNA 构建体整合到分化和非分裂细胞中,例如神经元和树突状细胞。
象形图 |
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警示语 |
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Class |
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警告声明 |
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UNub |
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危险声明 |
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