Sigma′s GenElute哺乳动物总RNA小量制备试剂盒提供了一种从哺乳动物细胞和组织中分离总RNA的简单便捷方法。提供了细胞,组织和纤维组织的方案。这些方案的细胞裂解和破坏条件不同。一旦RNA结合到GenElute结合柱上,所有起始物料的纯化程序都是相同的。对于纤维组织,试剂盒必须与蛋白酶K(目录号P4850)一起使用,以确保有效的细胞破碎。 该试剂盒结合了基于二氧化硅和微针形式的优点,无需使用氯化铯梯度、酒精沉淀和有害的有机化合物,如苯酚和氯仿。细胞或组织在含有硫氰酸胍的缓冲液中裂解和匀浆,以确保
大分子彻底变性和RNase失活。当裂解物在微量离心管中通过二氧化硅膜旋转时,乙醇的加入会导致RNA结合。 洗涤去除污染物后,在50-100 μL洗脱液中洗脱RNA。 在不到30分钟的时间内可以分离出多达150 μg的总RNA。
如果必须消除所有痕量的DNA污染,建议用DNase I进一步处理。当RNA与GenElute结合柱结合时,可使用柱上DNase I消化装置(DNASE10和DNASE70)进行DNase I消化。或者,为了更严格地去除污染的DNA,可以用扩增级DNase I(AMPD1)处理最终的RNA制剂。
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